CFSE, o carboxyfluorescein-succinimidyl-estere, è una cellula fluorescente macchiatura soluzione utilizzata negli studi di migrazione dei linfociti. I linfociti sono le cellule bianche del sangue che hanno la capacità di spostare fuori dal flusso di sangue per catturare alieni microrganismi, giocando un ruolo importante nella difesa immunitaria. CFSE può essere utilizzato anche per etichettare timociti e cellule embrionali, secondo "Immunologia e biologia delle cellule."

Protocollo di colorazione linfocitarie umano

Tecnici di preparano una sospensione di cellule con 20 milioni di cellule per ml in 0,1% siero bovino fetale (FBS) e tamponato fosfato salino (PBS). Essi aggiungono CFSE e lasciate sospensione riposare per otto minuti, secondo The University of Kansas Medical Center. FBS pre-riscaldato viene quindi aggiunto e le cellule vengono incubate in un bagno di acqua a 98,6 gradi Fahrenheit per 10 minuti. Le cellule sono poi centrifugato per cinque minuti, il surnatante viene scartato e le cellule vengono lavate in una soluzione di 2% FBS/PBS tre volte. Le cellule vengono fissate con paraformaldeide.

Semplificata CFSE protocollo di colorazione

Tecnici di centrifugare i campioni di sangue, eliminando le cellule rosse. Più tardi, si lavano i linfociti con PBS per rimuovere la proteina libera. Per essere in grado di osservare la divisione cellulare dopo due giorni, CFSE viene aggiunto in basse concentrazioni per otto minuti, poi la reazione viene bloccata con siero fetale di vitello. Le cellule vengono lavate due volte con PBS / FCS. Questo protocollo può essere usato negli esperimenti "in vivo" o "in vitro", secondo The Hedrick Lab presso l'Università della California.

Protocollo per l'attivazione delle cellule T CD8 Naive in Vitro

Un ingenuo cellula T è un linfocita che ha differenziato nel midollo osseo. Questo tipo di cella è considerato maturo, e le cellule rispondono a nuovi agenti patogeni che il sistema immunitario non ha mai incontrato. I tecnici Incubare i campioni di virus e cellula di Influenza sul ghiaccio per 30 minuti, centrifugare e continuano il processo di incubazione per 18 ore a 98,6 gradi Fahrenheit. Successivamente, le cellule sono colorate con CFSE e risultati sono analizzati in citometria a flusso.