Isotiocianato di fluoresceina, comunemente indicato come FITC - pronunciato "fit-c," rima con "fiorellini"..--è un marcatore fluorescente che è chimicamente legato, o coniugata, di altre molecole come proteine e anticorpi. Un anticorpo coniugato con FITC potrebbe anche essere definito come un "anticorpo marcato con FITC." FITC è eccitato dalla luce alla lunghezza d'onda di 488 nm ed emana energia fluorescente rilevato a 530 nm. Uno scienziato può vedere con un microscopio a fluorescenza o utilizzare attrezzature che rileva le emissioni fluorescenti e li registra.

Metodi

Coniugazione di FITC segue un protocollo di base. Ad esempio, FITC e un anticorpo sarebbe mescolati insieme a un determinato rapporto in una provetta e ruotati a temperatura ambiente per un'ora. Per rimuovere il CIC non associato dalla soluzione, è versato su una colonna di cromatografia di affinità..--un tubo di vetro riempita con un gel tallone-come che legherà il CIC non coniugato. Nel frattempo, l'anticorpo marcato con FITC fluirà attraverso la colonna e viene raccolto per l'uso.

Considerazioni

Prima di iniziare una coniugazione, il ricercatore dovrebbe prendere in considerazione diversi punti. In primo luogo, FITC è altamente instabile e non deve essere esposto alla luce..--dovrebbe essere tenuto in tubi di lamina-coperto in ogni momento. In secondo luogo, il tempo di Coniugazione e la temperatura potrebbe essere necessario essere alterato per una proteina sensibile alla temperatura. Infine, anticorpi e proteine differenti possono avere diverse capacità di FITC-associazione, quindi trovare il corretto rapporto di anticorpi FITC è critico; troppo poco FITC fa un anticorpo inosservabile e troppo può alterare la sua specificità. Per questo motivo, dovrebbero istituire preliminare coniugazioni su piccola scala in diversi rapporti di FITC all'anticorpo in parallelo. Una volta stabilito il rapporto ottimale, la coniugazione su larga scala può essere eseguita.

Utilizza

Medici e scienziati utilizzano FITC-etichettato anticorpi, ormoni e fattori di crescita in un'ampia varietà di analisi e applicazioni. Per esempio, una cellula staminale nel sangue presenta una molecola sulla superficie chiamato CD34. Un tecnico di laboratorio può mescolare il sangue di un paziente con un anticorpo marcato con FITC specifico per CD34 e attraversano le cellule un citometro a flusso che utilizza un raggio laser per rendere la FITC reagiscono in. Successivamente, il citometro separa le cellule CD34 fluorescente dal resto delle cellule del sangue, e i medici possono usare queste cellule staminali isolate per trattamenti terapeutici.