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Protocollo di analisi del Reporter di luciferase

La luce prodotta dalle lucciole è diventato uno strumento importante per i biologi molecolari. Lucciola bio-luminescenza - prodotto dalla conversione di luciferasi di luciferina ad ossiluciferina..--in primo luogo è stato identificato, caratterizzato e l'analisi del reporter di luciferase sviluppata da ricercatori della University of California, San Diego, nel 1986.

Definizioni

Acido desossiribonucleico (DNA) serve come il materiale genetico in cellule. Una sequenza del DNA del promotore controlla l'espressione di un gene - una sequenza di DNA che produce una proteina specifica. Come un pezzo di DNA separato, un plasmide contiene un gene, come luciferasi.

Metodi

Uno scienziato costruisce un plasmide che contiene un promotore ed il gene della luciferasi. Questo plasmide è transfected - presentare biologicamente, chimicamente o meccanicamente - in una cellula animale, e più tardi il aperto rotto di quella cella di rilasciare qualsiasi prodotto luciferasi. Luciferina viene aggiunto a questo mix di cella, e viene misurata la quantità di bio-luminescenza prodotta dalla conversione luciferasi di luciferina ad ossiluciferina. Kit e protocolli dettagliati sono disponibili in commercio per questo test.

Utilizza

La quantità di bio-luminescenza prodotta in questo dosaggio è proporzionale alla forza del promotore e pertanto funge da un metodo utile per confrontare differenti promotori. Questo diventa importante in ambienti industriali, come promotori ottimizzati potrebbero aumentare la quantità di proteina prodotta nello stesso lasso di tempo.